我们将免疫试剂中关键原料提炼出来,分为两块:抗原抗体和特殊成分。
免疫试剂一般可以分为两个过程:免疫反应和显色反应。免疫反应是核心,将待测物特异性地从复杂样本中分离出来,这一环节的好坏,直接决定整个试剂的核心质量。
在工业生产上,免疫检测用的抗体,一般是通过工程菌表达抗原片段,免疫动物,进行多克隆或者单克隆抗体制备,然后得到的抗体,进行配对筛选,选出合适的配对应用于免疫检测。在这个过程中,由于待测抗原一般都是天然抗原(少数科研检测重组抗原),而制备和筛选抗体一般又是使用重组抗原,因此会带来很多应用问题,这个对抗体制备商来说,值得重视。
免疫反应做为一个脆弱的非共价键结合过程,整个反应受时间、干扰物、桥联物、结构类似物等影响,为消除这些不良影响,一般在缓冲体系中会增加一些特殊成分,这些特殊成分我们定义为次要原料,在工艺中详述。
工艺包含配方体系和工艺流程,两者相辅相成。所有的配方和工艺,是为保障和提高产品性能而设计的,当原料无法满足产品性能要求时,如何通过配方工艺来提高,或者说,哪些性能能通过配方工艺来提高,如何来提高,哪些只能由原料决定,这个在我们研发职业生涯中,要不断积累与完善。
配方体系可以拆解为缓冲体系和改进体系。
(1)缓冲体系 一般的缓冲体系,在教科书、产品说明书、论文中均可见到,主要包含离子对类型、离子浓度、pH值等内容,非保密配方,比较容易理解与掌握。
(2)改进体系 因为免疫反应的非共价键结合的脆弱性,依靠一个简单缓冲体系,要获得很好的反应结果,是比较困难的,针对这种问题,科学家设计了各种改进体系,这些体系下面,又有各种方法产生。
A、降低本底体系
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使用合适的包被、标记浓度,一般采用棋盘滴定确定。
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加入增加溶解率,降低非特异吸附的物质,如曲通、吐温。
B、减少干扰体系
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加入正常鼠血清或者鼠IgG,降低人抗鼠抗体影响
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加入阻断剂,降低类风湿因子干扰
C、减少前带效应体系
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适当提高包被和标记浓度,兼顾本底
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加入检测抗体裸抗,兼顾灵敏度
D、增加灵敏度体系
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加入曲通、吐温等
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加入特殊物质,如S19
E、提高检出率体系
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多个抗体联合使用,如CnTI项目
F、提高稳定性体系
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缓冲液加入保护性蛋白、糖类、小分子化合物
G、等等其他体系 随着研究深入,这个目录会不断增加,相应的方法也会不断增多。
工艺流程,又包含生产工艺流程和试剂盒检测操作工艺流程两个方面。
(1)生产工艺流程 生产工艺流程,对整个的产品性能,有非常大的影响,比如预包被板制备工艺,包被、封闭、干燥的温度、时间,对整个性能影响很大,需要研发摸索。
(2)检测操作工艺流程 相比生产工艺,试剂盒的检测操作工艺,对性能影响更大,一步法、两步法,加样量,加样顺序,温育温度,温育时间。
